混合抗球蛋白反应试验

• 来源：北京家圆医院
• 2009年07月01日 16:35
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混合抗球蛋白反应试验（m ixed antiglobulin reaction test，M AR test）

　　【原理】

　　本法由 Coombs及 Rumke于 1973年首先报道，原理为经典的 Coombs试验。由于在本试验中阳性表现为活动精子与敏化乳胶（或红细胞）的混合凝集，故又称为混合凝集试验。先制备吸附有人 IgG 的乳胶颗粒或绵羊红细胞，然后将精液与包被的乳胶颗粒一起作用，再与抗人 IgG 抗血清反应。如果精子包被有 As-Ab，可形成活动的精子与乳胶颗粒的混合凝集物。反之，乳胶颗粒则互相黏着成团。

　　【试剂】

　　（1）人 IgG 包被的乳胶颗粒或绵羊红细胞。

　　（2）抗人 IgG 抗血清。

　　【方法】

　　（1）直接法：检测活动精子表面的精子结合抗体。

　　1）取新鲜液化待检精液 10μL 于载玻片上。

　　2）加 10μL 乳胶抗原并用盖玻片充分混匀。

　　3）加 10μL 抗血清，再用盖玻片充分混匀，盖上盖玻片，5min内镜下（400× ）看结果。

　　（2）间接法：检测血清、生殖道分泌液中的精子抗体。

　　1）待检血清或生殖道分泌液经 56℃ 30min灭活。

　　2）待检血清或生殖道分泌液 5μL 加培养液（如 RPMI1640）35μL 于小试管中。

　　3）加新鲜液化正常人精液 40μL 混匀，37℃ 1h。

　　4）取上述保温后混合物 10μL 于载玻片上。

　　5）以下按直接法 2）、3）步骤操作。

　　【结果判定】

　　没有包被抗体的精子可以在乳胶颗粒之间自由泳动，而乳胶颗粒自己粘附成团。如果精子上包被有抗精子抗体，活动精子粘着乳胶颗粒，开始时可以看到这些活动精子周围粘着几个或一串乳胶颗粒来回游动，较终凝聚块变得越来越大，粘附到一起的精子只能在原地摆动。计数粘着有乳胶颗粒的活动精子的百分率（% ）。当 40% 或更多运动精子粘附有这种颗粒时，诊断为免疫性不育。10% ～ 40% 运动精子被粘附时，为可疑免疫性不育。