精子凝结试验——改良浅盘法

• 来源：北京家圆医院
• 2009年07月01日 16:13
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改良浅盘法（改良 TAT 法）

　　【准备】

　　（1）配制 0.01mol/L pH 7.4磷酸缓冲液（PBS）。

　　（2）配制 0.01% 葡萄糖-PBS。

　　（3）以 Costar组织培养板（3696）代替浅盘。

　　（4）Hamilton微量注射器（50μL）型号 1705。

　　（5）待检血清在 37℃ 水浴中融化，并在 56℃ 30min作灭活处理。用 0.01% 葡萄糖-PBS把血清作 1∶16、1∶32、1∶64对倍稀释。

　　（6）精子悬液：新鲜液化精液首先通过玻璃棉过滤，以除去碎片和杂质块，并用 0.01%葡萄糖-PBS液调精子浓度为 40×106/mL。

　　【方法】

　　（1）每份稀释血清取 30μL加入 96孔 Costar组织培养板孔内，外周一行板孔不用，因外周一行板孔蒸发快，每孔再加入 3μL精子悬液。

　　（2）把培养板移入 37℃ 湿盒内，孵育 2h。

　　（3）用倒置显微镜的低倍镜（40× ，100× ）观察凝集程度，以高倍镜（200× ，400× ）观察凝集型。

　　【判断】

　　（1）精子有明显凝集为阳性，精子分散无凝集为阴性。

　　（2）凝集精子达≥75% 记" + + + "，凝集精子在≥50% 和≤75% 时记" + + "，凝集精子≤50% 时记" + "。

　　（3）血清效价：精子凝集至少在 1∶16 和 1∶32 两个稀释度出现时，才判血清抗体为（ + ），若只有一个稀释度出现凝集（如 1∶16），而 1∶32无凝集，则要重试 1∶8、1∶16、1∶32，抗体效价为出现凝集终点的血清稀释度。