免疫组化法检测抗精子抗体

• 来源：北京家圆医院
• 2009年07月01日 16:31
• 【字体：大 小 中 】

        当分布于组织中的物质能作为抗原时，则可在组织片上观察该物质的抗原抗体反应，为此所采用的技术方法统称为免疫组织化学方法。

　　一般说来，发生在组织或细胞内的抗原抗体反应是不可见的，借助于荧光素、酶等标记抗体与相关的抗原相结合。由于荧光素所发荧光可用荧光显微镜检出，而酶可经一定的显色处理，呈现醒目的阳性色彩，从而可地对相应的抗原或抗体进行定位或定性。免疫组化是一种高度敏感和的技术，可分为用荧光标记抗体的荧光抗体法和用辣根过氧化物酶等酶类结合在抗体上，用以观察产生酶反应的活性部位的酶抗体法。

　　（一）间接荧光抗体试验

　　将已知抗原（精子）与第一抗体（待检血清）结合后，再与经异硫氰酸荧光素（FITC）标记的第二抗体结合后，在荧光显微镜下，可见绿色荧光，从而判断患者血清中是否存在抗精子抗体。

　　【试剂】

　　（1）0.01mol/L pH 7.4 磷酸缓冲液（PBS）。

　　（2）甲醇（分析纯）。

　　（3）羊抗人 IgG-FITC。

　　【方法】

　　（1）取正常男性精液，自然液化。

　　（2）PBS离心洗涤 3次，去除精浆，调精子浓度为 5×104/mL。

　　（3）精子悬液涂片，室温自然干燥。

　　（4）甲醇固定 10min。

　　（5）滴加待检血清、阳性血清、阴性血清（处女 AB 型血清），37℃ 湿盒30min。

　　（6）PBS洗 3次，每次浸洗 3min。

　　（7）滴加羊抗人 IgG-FITC，37℃ 湿盒 30min。

　　（8）PBS洗 3次后，荧光镜下观察结果。

　　【结果】

　　荧光镜下观察，精子头部、中段出现荧光为抗精子抗体阳性。